畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (4): 650-656.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.020
肖启玲1,2,李朋辉1,2,闫秉芳3,杨路1,2,王喜亮1,2,肖运才1,2,李自力1,2,刘梅1,2,毕丁仁1,2,石德时1,2*
收稿日期:
2014-07-04
出版日期:
2015-04-23
发布日期:
2015-04-23
通讯作者:
石德时,E-mail:rock@mail.hzau.edu.cn
作者简介:
肖启玲(1989-),女,四川达州人,硕士,主要从事药物代谢酶的分子生物学研究,Tel:027-87280032,E-mail:xiaoqilingk@sina.com
基金资助:
国家自然科学基金(31372484);湖北省自然科学基金(2012FFB02906);中央高校基本科研业务费专项资金(2011PY117)
XIAO Qi-ling1,2,LI Peng-hui1,2,YAN Bing-fang3,YANG Lu1,2,WANG Xi-liang1,2,XIAO Yun-cai1,2,LI Zi-li1,2,LIU Mei1,2,BI Ding-ren1,2,SHI De-shi1,2*
Received:
2014-07-04
Online:
2015-04-23
Published:
2015-04-23
Supported by:
摘要:
为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在OrigamiTM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到PLE1基因编码区全长1 686 bp的片段,该片段编码562个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting 结果显示,PLE1融合蛋白质成功表达,在30 ℃的培养温度下,IPTG诱导6 h后,PLE1重组蛋白质表达量最高,且大部分以可溶性形式存在。酶活性试验结果表明,PLE1融合蛋白质水解底物p-NPA的酶活力为1.24 U。研究结果不仅为研究PLE1水解兽药特性提供高纯度的具有原有酶活性的重组蛋白质,也为PLE同工酶家族其他重要成员的活性功能研究提供理论依据和技术手段。
中图分类号:
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